第281章 变异感染者DNA提取 （2 / 2）
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4. 准备70℃温浴。
5. 使用前检查Buffer BL 是否有沉淀析出，若出现沉淀，请于70℃温浴加热至沉淀完全溶解后再使用。
完成试剂准备工作之后，在钟教授的首肯之下，研究员开始进行DNA的提取。
具体操作步骤如下：
1. 向96 圆孔板的每孔中加入20 ul 蛋白酶K。
2. 加200 ul 抗凝全血到96 圆孔板中。
~undefined 若全血样品体积少于200 ul，用PBS 补充到200 ul。
~undefined 若样品为鸟类血，样品用量须低于10 ul。
~undefined 若需得到RNA-free 的基因组DNA，在步骤3 加入Buffer BL 前加入DNase-free 的RNase A(20 mg/ ml) 。
3. 加200 ul Buffer BL ，注意不要打湿每孔的边缘，用96 圆孔硅胶片密封各孔。
4. 用力混合30 s。
5. 3000 rpm 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rpm后即停止。
6. 在培养箱或烘箱中70℃温浴至少10 min。
7. 3 000 rpm 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3 000rpm后即停止。
8. 取下96 圆孔硅胶片，每孔加入200 ul 乙醇（96-100%）。
9. 用96 圆孔硅胶片密封各孔，用力混匀混合15 s。3 000 rpm 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到圆孔板内。启动离心机，当速度达到3 000 rpm 后即停止。
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10. 将96 孔DNA 板放到一洁净的96 孔1.6 ml 深孔板。取下圆孔板上的96 圆孔硅胶片，将每孔中的溶液转移至96 孔DNA 板 中，6 000 rpm 离心4 min。
11. 丢弃96 孔1.6 ml 深孔板的滤液，将96 孔DNA 板放回到96 孔1.6 ml 深孔板上，每孔加入500 ul Buffer W1B，用一新的BF-400 膜密封96 孔DNA 板，6 000 rpm 离心4 min。
~undefined 确认在Buffer W1B trate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
12. 丢弃96 孔1.6 ml 深孔板的滤液，将96 孔DNA 板放回到96 孔1.6 ml 深孔板上，每孔加入850 ul Buffer W2，用另一新 的BF-400膜密封96孔DNA板，6 000 rpm 离心4 min。
~undefined 确认在Buffer W2 trate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
13. 弃滤液，将96孔DNA板放回到96孔1.6 ml 深孔板上，每孔加入400 ul Buffer W2， 用另一新的BF-400 膜密封96 孔DNA 板，6 000 rpm 离心4 min。
14. 将96孔DNA板放在一洁净的96 孔1.6 ml 深孔板上，用BF-400膜密封96孔DNA板，6 000 rpm离心15 min。
15. 将96孔DNA板放在另一洁净的96 孔1.6 ml 深孔板上，每孔加入100-200 ul Eluent B 或去离子水，室温静置2 min，用另一新的BF-400膜密封96 孔DNA板，6 000 rpm 离心4min洗脱得到DNA。
看着最终提取出来的DNA样本，钟教授终于露出了满意的微笑......